英文名稱:Human IL-10 protein, His Tag
中文名稱:【IL10】重組人白介素10,his-標簽
產品類型:細胞因子
供應商:Abbkine
產品貨號:PRP100227
產品規格:5ug/20ug/100ug
背景資料:白細胞介素,簡稱白介素,是指在白細胞或免疫細胞間相互作用的淋巴因子,它和血細胞生長因子同屬細胞因子。兩者相互協調,相互作用,共同完成造血和免疫調節功能。白細胞介素在傳遞信息,激活與調節免疫細胞,介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應中起重要作用。
免疫原:氨基酸序列來源于:人源 IL10 (NP_000563.1)。(Ser 19-Asn 178)為表達的蛋白片段, with a N-terminal polyhistidine tag.
來源宿主:人源細胞
溶解建議:艾美捷溫馨提示:開蓋前,請先離心。廠家建議您,溶解凍干粉的重組人IL10, His Tag于無菌的ddH2O中,濃度不低于100ug/ml,便于您根據不同的實驗需求,進行進一步的稀釋。
保存建議:本產品為凍干粉形式,廠家建議:將凍干粉的【IL10】重組人白介素10,his-標簽產品保存于-18℃以下的干燥環境中。本產品溶解之后,本產品可在4℃保存2-7天,長期使用請置于-18℃以下。為長期保存,廠家推薦您添加載體蛋白(0.1%HSA或者BSA),并酌情分裝保存。 請注意避免反復凍融。
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相關標簽抗體:IL10,Human IL-10 protein, His Tag,【IL10】重組人白介素10,his-標簽
兔子白介素10(IL-10)ELISA試劑盒
使用目的: 為定量(性)測定活化的目標濃度的血清,血漿,組織勻漿,細胞培養上清及其他生物液體。研究使用不是用于診斷或治療程序。 如果你有任何問題,請聯系上海義森生物科技有限公司。
兔子白介素10(IL-10)ELISA試劑盒
注意事項1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。9. 不能使用過期產品。10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。 試劑準備試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。1. 標準品復溶:試劑盒提供6管標準品,每管已標定濃度,并且凍干。實驗前在每個標準品管中加入0.5mL樣本稀釋液,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動助其溶解,使其恢復為每個標準品管身標注的濃度。2. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
兔子白介素10(IL-10)ELISA試劑盒
操作步驟1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4-5次(也可用洗板機洗板)。6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。 實驗結果計算以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
小鼠白介素10(IL-10)elisa試劑盒 | ![]() | |
英文名稱: | Mouse interleukin 10,IL-10 ELISA KIT | |
產品用途: | 僅用于科研實驗,嚴禁用于臨床診斷 | |
樣本體積: | 50-100ul | |
保存條件: | 2-8℃下,可放置24-48小時.-70℃下,可放置6個月 | |
檢測樣本: | 血清、血漿細胞上清液、灌洗液。 | |
產地: | 中國·青島 | 電子名片 |
三 、訂購信息:
編號 | 產品名稱 | 規格 | 保存條件 | 檢測方法 | 產地 | 價格-優惠 |
SJH-033004 | 小鼠白介素10(IL-10)elisa試劑盒 | 48T/96T | 2-8℃保存 | 雙抗夾心法 | 國產/進口 | 點擊咨詢 |
三、蛋白圖譜:暫無
四 、產品優勢介紹: 1、本品采用天然抗體包被而成,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便等特點。 2、部分指標產品采用進口原裝抗體包被,質量放心可靠。 3、可提供免費打代測服務,山東省內可上門取樣。 4、一次購買十盒或一個月累計購買十盒可享受經銷商提貨價。 5、可為 自測可戶提供全程技術支持。五、選購原則: 1·是檢測抗體還是抗原。 2·檢測的結果是定性還是定量。 3·是否需要檢測特異抗體的類型。 4·所用抗體/單克隆抗體的親和力/親和力怎么樣 [1]檢測抗原最常用于檢測抗原的方法是非競爭性的雙抗體夾心法,其次是競爭法,但競爭法 在具體 實驗中有些困難;特別是檢測微生物的抗原,因為其需標記抗原,對于 某些抗原很難做到甚至是不可能的。在競爭法中,沒標記的抗原與標本直接混合 在一起,許多標本中含有酶抑制劑或蛋白A樣物質(例如糞便),可影響elisa結[2]檢測抗體 檢測抗體種類常用的方法是檢測抗體種類的捕獲法,這個方法用于檢測特異性 IgG,IgA盒IgM。這個方法的第一步是因相捕獲的抗體是否是特異抗原的抗體。 間接elisa在家側IgG時比較簡單,但不適用于檢測其他種類的抗體。六、產品組成:
試劑盒組成 | 96孔配置 | 48孔配置 | 保存條件 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1個 | 1個 | |
酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標準品 | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶標試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
濃縮洗滌液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 | 2-8℃保存 |
上游產品 :
下游產品:人白介素10(IL-10)Elisa試劑盒,進口原裝,現貨供應,質量可靠,任何質量問題可包退包換,提供技術支持,售后服務,提供免費代測服務。詳情請來電咨詢。
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
人白介素10(IL-10)Elisa試劑盒,進口原裝,計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,
即為樣品的實際濃度。
人白介素10(IL-10)Elisa試劑盒,進口原裝,注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好
控制在5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值
大于標準品孔第一孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計
算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
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大鼠凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)Elisa試劑盒
大鼠凝血因子Ⅲ(FⅢ)Elisa試劑盒
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大鼠轉化生長因子β2(TGFβ2)Elisa試劑盒
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保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月
人白介素10(IL-10)Elisa試劑盒,進口原裝,操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
1600 pmol/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
800 pmol/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
400 pmol/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
200 pmol/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
100 pmol/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣稀釋液40μl,
然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行。
歡迎前來咨詢訂購。
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HF1736-F 大鼠白介素10 ELISA試劑盒 Rat Interleukin 10,IL-10 ELISA KIT 原裝進口
大鼠白介素10 ELISA試劑盒
包裝:原裝分裝48T/96T ELISA試劑
Elisa試劑盒測定技術的發展:臨床測定技術的發展主要在于方法學的發展,而方法學的發展依托于試劑生產技術不斷更新和型標記物的應用。目前,分子生物學正在并最終肯定會讓我們對整個生命科學有一個而的認識,其對免疫測定技術發展的影響也是直接而又的,它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。基因工程試劑對免疫測定技術發展的影響:免疫測定技術的基礎在于抗原抗體之間的特異結合反應,所以任何的診斷試劑離不開的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過各總化學合成方法制備。近年來,隨著分子生物學的發展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實的新一代試劑,各種新型使用的測定方法也不斷出現。elisa試劑盒的用途:用于盛放檢測化學成分、藥物殘留、病毒種類
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是一家技術服務型渠道企業,在行業發展中所承擔的角色是一種溝通產出方和需求方(科研和市場)的媒介,我們為行業人才提供了包括科研在內的更多出口,為科研提供了有力的硬件支持,地促進科研和市場需求結合,提高了科研成果的轉化效率,使得科研更具活力。目前國家對于生物行業的發展給予了極大的重視,但更多地側重于科研的投入,行業內缺乏的技術服務體系和渠道支撐...
兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒
本試劑僅供研究使用 標本:血清或血漿及相關液體
兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒試驗原理:
兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒是采用夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA)方法。
兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒內容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
96/48人份酶標板 | 1塊板(96T) | 半塊板(48T) | 即用型 |
塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 | 即用型 |
標準品:240ng/L | 1瓶(0.6ml) | 1瓶(0.3ml) | 按說明書進行稀稀 |
空白對照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) | 即用型 |
標準品稀釋緩沖液 | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
生物素標記的抗BA抗體 | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
親和鏈酶素-HRP | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
洗滌緩沖液 | 1瓶(20ml) | 1瓶(20ml) | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
終止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
標本稀釋液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒操作注意事項
1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀釋過后的標準品應丟棄,不可保存。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
3. 不用的其它試劑,應包裝好或蓋好,不同批號的試劑不要混用,保質前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A易揮發,避免長時間打開蓋子,底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒,實驗完成后應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒樣品收集、處理及保存方法
1、 血 清-----操作過程中避免任何細胞刺激,使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血 漿----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液--1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿---將組織加入適量生理鹽水搗碎,1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保 存----如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-80 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾,不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒試劑的準備
1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存,稀釋前將標準品振蕩混勻,稀釋比例按說明書要求進行。
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,每個標準品和空白孔建議做復孔,每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體,蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次,如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入50ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次,如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒性能
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990以上。
2.批內與批間應分別小于9%和11%
兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒保存條件及有效期:
1. 試劑盒保存:2-8℃
2. 有效期:6個月
3. 產品運輸:專用冷藏包,優先順豐快運,確保產品安全送達。
問:兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒48T/96T分別可以檢測多少個樣本?
答:96T檢測85個樣本,剩余 的11個孔為高低濃度標準孔加1個空白對照孔。
48T檢測37個樣本,剩余 的11個孔為高低濃度標準孔加1個空白對照孔。
問:兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒售后服務是怎么樣的?
答:武漢賽培生產的試劑盒,有專門的生物技術售后團隊,實驗中需要技術指導的話,可撥打公司技術專線,有一對一的咨詢解答服務。
問:兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒代測寄樣本有什么要求?答:單純血清血漿,可以用泡沫盒子加冰袋快遞運輸,若凍存的樣本,用干冰運輸更好。
問:兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒樣本保存期限多久?
答:2-8℃≤1周; -20℃1周<t≤30天; -80℃>30天。
問:兔子白介素10(IL-10)elisa試劑盒實驗設置復孔有什么好處?
答:實驗設復孔個人認為有以下幾個優點:1.試驗中的隨機性比較大,設多個復孔可以去處部分偏差大的數據減少檢測的誤差;2.設置多個復孔具有統計學意義,否則很難說明數據是偶然的還是真實的;3.設置復孔可以避免由于主觀因素造成的誤差;總的來說是為了,你得到的數據更接近與真實值,避免試驗客觀和主觀誤差。
問:武漢賽培生物生產的試劑盒與其它廠家的優勢在哪里?
答:武漢賽培生物的試劑盒變異系數小,試劑盒穩定性更高,批間和批內重復性偏差CV值都會控制在7%以下;上萬種ELISA試劑盒指標齊全,客戶下單后交貨迅速(大部分產品在一周以內交貨);實驗室提供免費代測服務,為您節省實驗時間;公司有專門技術部門提供一對一的售后服務,為您的實驗保駕護航;產品免費包郵,優先選擇順豐快運,保證貨物安全送達。 武漢賽培生物科技有限公司,高品質ELISA試劑盒供應商,大量現貨供應,廠家直銷,品質卓越,價格實惠,售后完善,提供免費代測服務,是您值得信賴的合作伙伴;ELISA檢測試劑盒價格,產品說明書等資料歡迎您來電免費索取。 武漢賽培生物科技有限公司 網站:www.spbio.cn QQ:16558017
elisa試劑盒適用范圍:(酶聯免疫吸附測定試劑盒)用于測定血清、血漿及相關液體樣本中的含量,嚴格按照說明書的操作進行,試劑不同批號組分不得混用。
elisa法測定試劑盒參數規格:
中文名稱:人白介素10(IL-10)elisa檢測試劑盒
規格:96T/48T
性狀:液體
存儲:4℃保存6個月
運輸方式:快遞發貨
檢測標本:血清,血漿,尿液,胸腹水,腦脊液,細胞培養上清,組織勻漿等
檢測方法:雙抗夾心法
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上海嵐派生物elisa試劑盒廠家主營如下:(產品選型)
試劑盒:大鼠elisa試劑盒,小鼠elisa試劑盒,人elisa試劑盒,犬elisa試劑盒,魚elisa試劑盒,雞elisa試劑盒,牛elisa試劑盒、其他動物類elisa試劑盒、植物elisa試劑盒、分子生物學試劑盒、 免疫組化試劑盒、金標檢測試劑盒、生化試劑盒、細胞凋亡試劑盒。
抗體:一抗、二抗、進口原裝抗體、進口分裝抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、單標抗體、雙標抗體、多標抗體;免疫組化抗體、免疫細胞化學抗體、免疫熒光抗體、流式細胞抗體。抗體:一抗、二抗、進口原裝抗體、進口分裝抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、單標抗體、雙標抗體、多標抗體;免疫組化抗體、免疫細胞化學抗體、免疫熒光抗體、流式細胞抗體。
動物血清:內皮細胞專用血清、GIBCO胎牛清、HyClone。動物血清:內皮細胞專用血清、GIBCO胎牛清、HyClone。
細胞:原裝進口細胞、正常細胞、腫瘤細胞、腫瘤耐藥細胞。細胞:原裝進口細胞、正常細胞、腫瘤細胞、腫瘤耐藥細胞。
酶聯免疫吸附測定enzyme linked immunosorbent assay(簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。酶聯免疫吸附測定(ELISA)為免疫學中的經典實驗。
酶聯免疫吸附測定試劑盒工作原理:
1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量測定的文章,使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法。這一方法的基本原理是:①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化變為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,故可極大地放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。
酶聯免疫吸附測定試劑盒檢測方法:(操作流程)
夾心法
夾心法常用于檢測大分子抗原,一般之操作步驟為:
1、將具有專一性之抗體固著(coating)于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體;
2、加入待測檢體,檢體中若含有待測之抗原,則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結;
3、洗去多余待測檢體,加入另一種對抗原專一之一次抗體,與待測抗原進行鍵結;
4、洗去多余未鍵結一次抗體,加入帶有酵素之二次抗體,與一次抗體鍵結;
5、洗去多余未鍵結二次抗體,加入酵素受質使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結果。
間接法
間接法常用于檢測抗體,一般之操作步驟為:
1、將已知之抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余之抗原;
2、加入待測檢體,檢體中若含有待測之一次抗體,則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結;
3、洗去多余待測檢體,加入帶有酵素之二次抗體,與待測之一次抗體鍵結;
4、洗去多余未鍵結二次抗體,加入酵素受質使酵素呈色,藉儀器(elisa reader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評估有色終產物的含量即可測量待測抗體的含量。
競爭法
競爭法是一種較少用到的elisa檢測機制,一般用于檢測小分子抗原,其操作步驟為:
1、將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體;
2、加入待測檢體,使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結;
3、加入帶有酵素之抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結,由于塑膠孔盤上固著的抗體數量有限,因此當檢體中抗原的量越多,則帶有酵素之抗原可鍵結的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結,即所謂競爭法之由來;
4、洗去檢體與帶有酵素之抗原,加入酵素受質使酵素呈色,當檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少,顯色也就越淺。
當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時,一般會考慮使用競爭法elisa。
酶聯免疫吸附測定試劑盒測試報告:
定性測定
定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答,分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果,即用滴度來表示反應的強度,其實質仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中,將標本作一系列稀釋后進行試驗,呈陽性反應的最高稀釋度即為滴度。根據滴度的高低,可以判斷標本反應性的強弱,這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。
在間接法和夾心法elisa中,陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反,陰性孔呈色深于陽性孔。
定量測定
elisa操作步驟復雜,影響反應因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質的夾心法elisa,標準曲線的范圍一般較寬,曲線最高點的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數紙,以檢測物的濃度為橫坐標,以吸光度為縱坐標,將各濃度的值逐點連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是最理想的檢測區域。
測定小分子量物質常用競爭法,其標準曲線中吸光度與受檢物質的濃度呈負相關。標準曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。elisa測定的標準曲線注意圖中橫坐標為對數關系,這更有利于測定系統的表達。
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